］。我国饲料产业庞大，但同时我国也是一个饲料资源尤其是优质蛋白质原料匮乏的国家。每年我国粮油饲料资源进口量都在

  豆粕与其他植物源性蛋白质原料相比较，具有较高的营养价值，如较高的赖氨酸和蛋白质含量，且氨基酸组成均衡，但同时豆粕也含有多种抗营养因子和致敏因子等，这些物质的存在会引起仔猪的过敏反应，很大程度上影响了营养的东西的消化和吸收，严重时还能引起腹泻［3］，这一些因素都限制了豆粕在仔猪阶段的大量添加。针对目前存在的问题，如何去除豆粕中的抗营养因子，提高其营养价值和扩大应用场景范围，具有重大的现实意义。发酵无疑是去除豆粕中抗营养因子的一种经济且有效的手段，随着研究的深入，发酵豆粕技术日渐成熟，在亚洲和美国的养殖业中得到了大规模的应用［4］。

  近些年，发酵豆粕技术在我国也得到了长足的进步和发展，但整个行业研发和产业化水平不高，生产企业都会存在:1)菌种方面，发酵菌种来源不明、不纯及退化现象严重;2)工艺方面，未经过严格的工艺匹配，往往进行粗放式自然发酵，生产的基本工艺的不稳定致使挥发性盐基氮、霉菌毒素及有害微生物超标严重［5］。这些不稳定因素严重制约了发酵豆粕在养殖业中的应用。混菌发酵是近年来饲料行业研究的热点，混菌发酵不仅可降低豆粕中的抗营养因子，提高营养价值，还可保留一定量的有益菌。本试验采用纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳酸杆菌作为发酵菌种，采用两步法发酵制备发酵豆粕，并通过仔猪生长试验验证饲喂效果，旨在为饲料行业的发展提供一些借鉴和参考。

  首先是菌种扩大培养，把斜面保藏的纳豆芽孢杆菌接种于LB培养基中，然后置于恒温震荡摇床中，在180 r/min及36℃条件下培养18 h;嗜酸乳酸杆菌接种于MＲS培养基中，在厌氧瓶中35℃条件下静置培养20 h。实验室培养的菌种通过镜检达到一定的要求后，分别接种于5 m3的不锈钢通风发酵罐，以及5 m3的厌氧发酵罐中(通入无菌氮气)。

  接下来是固体发酵阶段，豆粕经过紫外线照射灭菌后，与水和纳豆芽孢杆菌菌液(1×109 CFU /mL)按照体积比100．0∶80．0∶0．5的比例经过连续混料机混合均匀，再通过物料输送设备输送至履带式发酵机上，通过布料板保持履带上物料厚度为20 cm。控制发酵室的温度为30℃，相对湿度为70%，并通入无菌空气保持一定的氧气浓度，好氧发酵阶段维持的时间为24 h。第1阶段发酵结束后，将发酵机上的物料输送至混料机，按照体积比100．0∶0．5比例与嗜酸乳酸杆菌菌液(1×109 CFU /mL)混合均匀后输送至下一发酵室。保持温度和相对湿度恒定，然后缓慢通入无菌氮气进行48 h厌氧发酵。72 h的固体发酵结束后，发酵产物通过三回程滚筒干燥机进行低温(55℃)干燥，再粉碎既得成品。

  试验选用120头28日龄、初始体重为(6．72±1．06)kg的健康三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪，随机分为4组，每组6个重复，每个重复5头猪。试验期为28 d，分为2个阶段，第1～14天为试验前期，第15～28天为试验后期。

  试验饲粮组成及营养水平见表1。各组饲粮均满足NＲC(2012)推荐的营养标准，其中试验1组、试验2组及试验3组分别以4．87%、9．74%和14．61%的发酵豆粕替代基础饲粮中6%、12%和18%的豆粕，并保证蛋白质原料为各组饲粮提供相同含量的粗蛋白质。各组饲粮均添加0．3%的三氧化二铬作为指示剂，用以测定营养的东西表观消化率。

  每个重复的5头猪处于同一栏中饲养，每栏配有不锈钢食槽及自动饮水器，圈舍环境和温度控制在(28±2)℃，相对湿度控制在(60±5)%。所有仔猪自由采食和饮水。试验期间仔猪的消毒、免疫及驱虫等工作按照猪场常规进行，每天早晚各打扫1遍圈舍，保持圈舍卫生清洁，并根据测定指标记录日常数据。

  由表2能够准确的看出，豆粕经过发酵后，粗蛋白质和酸溶蛋白含量分别增加了12.84%和5．45倍，大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和水苏糖含量分别降低了99.18%、91.69%和97.09%，而棉子糖和胰蛋白酶抑制剂则完全被降解;另外，赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸的含量分别提高了4.29%、16. 21%和21.97%，乳酸杆菌活菌数达到1×10^7 CFU /g。

  如表3所示，各组仔猪初始体重差异不显著(P＞0.05)。与对照组相比，各试验组仔猪终末体重有所升高，且试验2组和试验3组明显高于对照组(P＜0.05)。在试验前期，与对照组及试验1组相比，试验2组和试验3组的ADG明显提高(P＜0.05)，腹泻率明显降低(P＜0.05)，同时试验3组的G /F也明显提高(P＜0.05)。在试验后期，各组ADG、ADFI、G /F及腹泻率差异都不显著(P＞0.05)。从全期来看，与对照组和试验1组相比，试验2组和试验3组的ADG明显提高(P＜0.05)，腹泻率明显降低(P＜0.05)，同时试验3组的G /F也明显提高(P＜0.05)。

  如表4所示，在试验第14天，与对照组相比，各试验组干物质、总能、粗蛋白质和有机物的表观消化率均明显提高(P＜0.05)。在试验第28天，试验3组总能和有机物的表观消化率明显高于对照组和试验1组(P＜0.05)，与试验2组差异不显著(P＞0.05)。

  如表5所示，在试验第14天，与对照组相比，试验2组和试验3组血清中IgA含量和SOD活性明显提高(P＜0.05)。另外，与对照组相比，各试验组血清中IgM含量均明显提高(P＜0.05)，且试验3组血清中GSH-Px活性明显提高(P＜0.05)。在试验第28天，与对照组相比，各试验组血清中GSH-Px活性明显提高(P＜0.05)，同时试验2组和试验3组血清中T-AOC明显提高(P＜0.05)。

  如表6所示，与对照组相比，试验2组和试验3组盲肠食糜中丁酸含量明显提高(P＜0.05)。

  如表7所示，与对照组相比，各试验组十二指肠和空肠黏膜中胰蛋白酶活性均明显提高(P＜0.05)，同时试验3组十二指肠黏膜以及试验2组和试验3组空肠黏膜中蛋白酶活性也明显提高(P＜0.05)。

  如表8所示，与对照组相比，各试验组十二指肠绒毛高度和绒腺比以及空肠绒毛高度均明显提高(P＜0．05)，且试验1组和试验2组十二指肠隐窝深度明显降低(P＜0.05)。

  如表9所示，与对照组相比，各试验组空肠黏膜中TNF-α含量明显提高(P＜0.05)。

  ②在本试验条件下，断奶仔猪饲粮中添加本试验所制备的两步法发酵豆粕可提高28～56日龄断奶仔猪的生长性能、营养的东西表观消化率并降低腹泻率，同时还可提高肠黏膜消化酶活性，改善肠道形态，其中添加9.74%和14.61%的发酵豆粕在改善仔猪生长性能等方面的效果要优于添加4．87%的发酵豆粕。综合考虑成本因素，推荐仔猪饲粮中以9.74%的发酵豆粕替代12%的豆粕使用。